¿Por qué aparecen colonias superficiales y subsuperficiales en una técnica de vertido en placa?

Escrito por david stewart | Traducido por paula santa cruz
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¿Por qué aparecen colonias superficiales y subsuperficiales en una técnica de vertido en placa?
La técnica de vertido en placa permite observar bacterias superficiales y subsuperficiales. (Bacteria Colonies image by ggw from Fotolia.com)

Los experimentos microbiológicos que involucran la enumeración de microorganismos en una muestra de cultivo usan diferentes métodos de caracterización. El método de siembra por estrías en placa consiste en hacer estrías con la muestra sobre la superficie de un medio de cultivo de agar estéril. En la técnica de vertido en placa, el agar fundido se vierte sobre la muestra y luego se invierte la placa. La técnica de siembra por estrías produce sólo colonias superficiales, mientras que la de vertido en placa muestra colonias tanto sobre como dentro de la capa de agar.

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Método de vertido en placa

En el método de vertido en placa, debes agregar a una pequeña cantidad de la muestra en una placa de Petri usando una pipeta. El siguiente paso es verter agar fundido dentro de la placa de tal manera que se cubra con la muestra. Se rota la placa algunas veces en ambas direcciones para asegurarse de mezclar el agar con la muestra. Cuando el agar se solidifica completamente, se invierten las placas y se incuban a la temperatura indicada.

Resultado del método de vertido en placa

Algunas de las unidades formadoras de colonias presentes en la muestra migran hacia la parte superior de la capa de agar en la placa invertida. A medida que el agar se sigue solidificando, otras colonias no pueden lograr esta transición y permanecen atrapadas dentro del gel de agar. Estas colonias aparecen dispersas dentro del medio de agar. Como resultado, al observar la placa de agar a lo largo de la incubación, se verán colonias tanto superficiales como subsuperficiales.

Ventajas del método de vertido en placa

Los aerobios obligados como el Micrococcus luteus que requieren oxígeno para su crecimiento no crecen dentro del agar. Los anaerobios facultativos como como la E. coli son capaces de crecer tanto en condiciones aeróbicas como anaeróbicas. Los microaerófilos como el Campylobacter crecen con tan solo 2 a 10% de oxígeno. El método de vertido en placa es propicio para el crecimiento de los microaerófilos y los anaerobios facultativos, pero no para los aerobios obligados ya que las unidades formadoras de colonias atrapadas dentro del agar no tienen acceso al oxígeno.

Desventajas del método de vertido en placa

Con el método de vertido en placa, es difícil recuperar las colonias subsuperficiales y caracterizarlas por conteo. Estas colonias son más pequeñas que las superficiales y es importante observar cuidadosamente la placa para asegurarse de no perder ninguna al contar. Por otro lado, ciertos tipos de células bacterianas son incapaces de soportar la temperatura del agar fundido y pueden morir. Si mantienes la placa de Petri abierta por un largo período de tiempo mientras viertes el agar, hay una posibilidad de contaminación ambiental que da como resultado el crecimiento de colonias superficiales no relacionadas con la muestra.

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