Cómo calcular la longitud de los fragmentos de ADN

Escrito por shawn radcliffe | Traducido por juliana star
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Cómo calcular la longitud de los fragmentos de ADN
Los científicos usan electroforesis en gel para determinar la longitud de los fragmentos de ADN. (Comstock/Comstock/Getty Images)

Los científicos usan una técnica llamada electroforesis en gel para determinar la longitud de los fragmentos de ADN. En este proceso las muestras desconocidas y un ADN estándar se colocan en pozos (pequeños agujeros) en la orilla de un gel. El estándar contiene fragmentos de tamaños conocidos medidos en pares de bases. Una corriente eléctrica ocasiona que los fragmentos de ADN cambien de ubicación a lo largo del gel y que las moléculas más cortas se muevan más lejos. La distancia viajada y el tamaño de los fragmentos estándar se representan gráficamente en papel semilogarítmico. La longitud de los fragmentos desconocidos se puede calcular comparando la distancia que recorrieron en el gráfico.

Nivel de dificultad:
Moderadamente difícil

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Necesitarás

  • Una foto de una electroforesis en gel
  • Papel semilogarítmico para gráficos

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Instrucciones

  1. 1

    Consigue la fotografía de un gel después de la electroforesis. Los fragmentos de ADN serán visibles como bandas en columnas conocidas como carriles.

  2. 2

    Identifica la columna que contenga el ADN estándar. Esta molécula de ADN ha sido cortada con una enzima para producir fragmentos de tamaño o peso molecular conocidos. Debe aparecer una banda que corresponda a cada fragmento.

  3. 3

    Etiqueta cada fragmento del ADN estándar con su tamaño midiendo en pares de bases. Esta información se proporciona con los suministros de gel para electroforesis o en la literatura científica.

  4. 4

    Mide la distancia que recorrieron los fragmentos de ADN estándar en milímetros. Mide desde la parte frontal del pozo (el lugar del gel donde fue colocada la muestra) hacia la parte frontal de la banda de muestra formada en el gel.

  5. 5

    Introduce los datos en una tabla.

    Curva estándar

  1. 1

    Consigue una hoja de papel semilogarítmico para gráficos en el que puedas trazar una curva estándar para el ADN estándar. Los papeles semilogarítmicos tienen una escala lineal en un eje y una escala logarítmica en el otro eje. Esto te permite trazar el logaritmo de la distancia viajada sin tener que calcularlo.

  2. 2

    Etiqueta el eje X con la distancia viajada por los fragmentos de ADN en milímetros. La escala del eje X debe ser lineal.

  3. 3

    Etiqueta el eje Y con el tamaño de los fragmentos de ADN en pares de bases. La escala del eje Y debe ser logarítmica.

  4. 4

    Traza la distancia viajada y el tamaño de los fragmentos de ADN estándar en el gráfico.

  5. 5

    Conecta los puntos con la línea que se ajuste mejor para crear una curva estándar. Esta es llamada curva estándar, pero la línea debe ser recta.

    Fragmentos de ADN desconocidos

  1. 1

    Mide la distancia viajada por los fragmentos de ADN desconocidos en milímetros.

  2. 2

    Localiza la distancia viajada por los fragmentos desconocidos en el eje X del gráfico.

  3. 3

    Traza una línea vertical a partir de ese punto en el eje X y hacia la curva estándar.

  4. 4

    Traza una línea horizontal desde el punto de intersección con la curva hacia el eje Y. Este es el tamaño del fragmento desconocido en pares de bases.

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