Algunas características de la precipitación de proteínas por sales

Escrito por john brennan | Traducido por mayra cabrera
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Algunas características de la precipitación de proteínas por sales
La "salazón" de proteínas es un primer paso habitual en los protocolos de purificación. (Hemera Technologies/AbleStock.com/Getty Images)

A bajas concentraciones, la sal puede ayudar a estabilizar las proteínas en una solución y, con ello, aumentar su solubilidad. En concentraciones más altas, sin embargo, la sal reduce la cantidad de agua disponible para hidratar a las proteínas y, más allá de un cierto umbral, las proteínas comenzarán a precipitarse. La adición de sal para eliminar las proteínas de una solución es a veces llamado "salazón".

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Solubilidad

Algunas proteínas son más solubles en agua que otras. Si una proteína tiene regiones más hidrofílicas ("que aman el agua"), serán más solubles que unas que sean más hidrofóbicas ("temerosas al agua"). A medida que aumenta la concentración de sal, las proteínas hidrofóbicas menos solubles y más solubles precipitarán primero. Las proteínas estrechamente relacionadas no se pueden separar por precipitación salina, porque van a precipitar a aproximadamente la misma concentración de sal, pero las que tienen estructuras y características muy diferentes a menudo se pueden separar de esta manera.

Sales

El sulfato de amonio es la sal más popular para este procedimiento, ya que tiene muy alta solubilidad en agua, incluso a temperaturas muy bajas. Normalmente, deseas mantener tu solución fría para inhibir la actividad de las proteasas, proteínas que cortan a otras proteínas. La concentración de sal se describe generalmente por el porcentaje de saturación, donde el 25% es el 25% de saturación (la concentración a la que no se puede disolver más sal).

Centrifugación

Por lo general, se añade la sal gradualmente a la solución de proteína mientras se agita con rapidez (un agitador magnético es muy útil para este tipo de procedimiento). La solución se centrifuga, lo que hace que algunas de las proteínas se precipiten. A menudo este procedimiento se divide en varios pasos. Es posible, por ejemplo, comenzar con 25% de saturación (un recorte del 25%), y luego ir a un corte de 75%. Este proceso permite dividir las proteínas en tres grupos, las que precipitan a 25%, las que precipitan a 75% y las que se precipitan en el medio.

Consideraciones

La salazón supondrá una pérdida de la proteína que deseas aislar. Cada proteína tiene su propia curva de solubilidad, la solubilidad de la proteína como una función de la concentración de soluto ("fuerza iónica"). Por consiguiente, incluso si el aumento de la concentración de sal es insuficiente para precipitar la totalidad de la proteína de interés, todavía se puede precipitar algo de ella. Por otra parte, no se puede utilizar la salazón para aislar una proteína específica, ya que otras proteínas se precipitan junto con ella. Por lo general, la salazón es sólo el primer paso de un proceso de purificación de proteínas.

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