Cómo cuantificar los geles de la electroforesis mediante imágenes

Escrito por palmer owyoung | Traducido por cecilia guichet
Cómo cuantificar los geles de la electroforesis mediante imágenes

Stockbyte/Stockbyte/Getty Images

La electroforesis es una técnica esencial utilizada para la clonación de genes y para otros experimentos avanzados en biología molecular. Los científicos utilizan habitualmente la electroforesis con un único propósito, separar los componentes moleculares individuales del ADN, ARN o proteínas en un gel plano. Este procedimiento le permite a los científicos determinar la cantidad de moléculas de un cierto tipo que hay presentes en una muestra y cuán grandes son estas moléculas. Para ello, se deja que la muestra migre a lo largo del gel, durante la migración esta se divide en bandas de diferentes tamaños en puntos bien definidos en el gel. Finalmente, se fotografía el gel que contiene las moléculas que han migrado. Esta es la imagen que debe ser cuantificada con el fin de analizar datos.

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Difícil

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  • Software de análisis de imágenes

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Instrucciones

    Cuantificación de las imágenes del gel de la electroforesis

  1. 1

    Elige un software de análisis de imágenes adecuado. Esto es obligatorio, por lo tanto se debe obtener con anterioridad el acceso a softwares de densitometría tales como Kodak DirectView EVP Plus y Carestream Molecular Imaging. Por otra parte, también hay disponibles softwares más económicos (por ejemplo, Adobe Photoshop) y de uso libre diseñados específicamente para el análisis de imágenes científicas (por ejemplo, ImageJ). ImageJ es un paquete gratuito que posee todas las funciones, se usa comúnmente en laboratorios de biología molecular y es fácil de operar. Para el propósito de este artículo, usaremos como ejemplo ImageJ. Sin embargo, los principios de cada paso son universales y fácilmente aplicables a todo tipo de software de análisis de imágenes.

  2. 2

    Convierte la imagen a un formato utilizable. ImageJ es compatible con muchos equipos de visualización de imágenes y cámaras utilizadas en los laboratorios que realizan la electroforesis. Sin embargo, es una práctica común crear .JPEG, .TIFF u otros formatos universales de la imagen para analizar.

  3. 3

    Importa la(s) imagen(es) al software de análisis de imágenes. Algunos software de análisis de imagen hacen que las imágenes importadas tengan una menor resolución, un contraste diferente y otros problemas de calidad de imagen, por lo que es una buena idea importar todos los formatos y elegir el que tenga la más alta calidad en el software elegido. ImageJ no tiene problemas de resolución y conserva la calidad de los datos en bruto.

  4. 4

    Convierte el color de la imagen a "escala de grises". En ImageJ, selecciona la solapa "imagen" y en el menú, haz clic en "escala de grises".

  5. 5

    Establece los parámetros de medición adecuados para el análisis. En la solapa Analizar, selecciona "Establecer mediciones", a continuación, selecciona los casilleros "Área", "valor medio de grises" y "Densidad integrada" en el menú desplegable.

  6. 6

    Establece la escala correcta para el análisis. En el software de ejemplo, haz clic en "Analizar", luego en "Establecer la escala" y en el espacio para la unidad de longitud, escribe "pixeles".

  7. 7

    Invierte los colores para tener claridad visual. En la solapa Editar, selecciona "Invertir" para que las zonas claras se vean oscuras y viceversa.

  8. 8

    Selecciona en la imagen las bandas deseadas. En la paleta de herramientas, seleccione la herramienta "Selección libre" y arrastra el puntero del mouse a lo largo del borde, ya sea, de la primera banda o la banda del experimento de control. Selecciona sólo la banda, y evita todas las sombras de fondo, que es esencialmente ruido.

  9. 9

    Mide (es decir, cuantifica) el área seleccionada. Pulsa "m" y en la ventana de resultados que aparece encontrarás las mediciones de densidad integrada, área, valor medio de grises, etc. Repite los pasos anteriores hasta que hayas medido todas las bandas. A continuación, copia todos los valores en una planilla de cálculo. Las imágenes cuantificadas ya están listas para el análisis de datos en el programa de planillas de cálculo.

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