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Diferencia entre el ELISA directo e indirecto

Escrito por david stewart | Traducido por cp mérida
Diferencia entre el ELISA directo e indirecto

laboratory image by Alhazm Salemi from Fotolia.com

Un ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA) implica la reacción de un complejo anticuerpo-enzima con un antígeno o anticuerpo que se mantiene inmóvil sobre una superficie sólida. En la incubación de la enzima conjugada con un sustrato adecuado, un producto es formado. La formación de un producto ayuda a detectar la presencia del antígeno o anticuerpo y su cantidad proporciona una medida de la cantidad de antígeno-anticuerpo de la reacción que se produjo. La prueba de ELISA se puede realizar de dos formas: directa e indirecta.

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Prueba de Formato

En la prueba de ELISA directa, un anticuerpo primario se lleva a cabo en las paredes de una placa de microtitulación. Cuando la muestra se sospecha que contienen el antígeno se añade, hay una reacción antígeno-anticuerpo. A continuación, un anticuerpo secundario ligado a una enzima que es capaz de reaccionar con el antígeno se añade. Si el antígeno está presente en la muestra, se une a este anticuerpo ligado a enzimas. Cuando un sustrato incoloro se añade, un color se desarrolla, indica la presencia de antígeno. En el ELISA indirecto, el antígeno se lleva a cabo en las paredes de la placa de microtitulación. Cuando una muestra sospechosa de contener anticuerpos se añade, una reacción antígeno-anticuerpo se produce. A continuación, un anticuerpo secundario ligado a enzimas capaces de reaccionar con la región no unida del anticuerpo, se añade. Cuando el sustrato incoloro se añade, conduce al desarrollo de color si la muestra utilizada contiene anticuerpos.

Facilidad de las pruebas

Una amplia gama de anticuerpos secundarios marcados están disponibles comercialmente. Además, es posible crear varios anticuerpos primarios en una especie dada y utilizar el mismo anticuerpo secundario para la detección. Esto hace que el ELISA indirecto sea fácil de realizar. En el ELISA directo, los anticuerpos primarios tienen que ser específicamente preparados para reaccionar con el antígeno específico que están presentes en la muestra. Esto hace que el ELISA directo sea desventajosa en comparación con la prueba indirecta.

La rapidez de las pruebas

La prueba de ELISA directa es rápida en comparación con la prueba indirecta, ya que sólo utiliza un único anticuerpo. El ELISA indirecto requiere una etapa adicional de incubación con un segundo anticuerpo durante el procedimiento de ensayo, lo que provoca un retraso en la obtención de resultados.

Sensibilidad

La prueba directa de ELISA es menos sensible que la forma indirecta de la prueba porque no es la amplificación de la señal mucho menos. Además, el etiquetado de la primaria de anticuerpos con una enzima puede afectar a su perfil de immonoreactividad. En el caso del ELISA indirecto, el anticuerpo primario no se etiqueta y, por tanto, conserva su inmunorreactividad. Además, cada anticuerpo primario tiene muchos epítopos que pueden unirse con el anticuerpo secundario, lo que permite la amplificación de la señal, la mejora de la sensibilidad del método. Sin embargo, hay una posibilidad de reactividad cruzada entre el antígeno y el anticuerpo secundario, dando lugar a un error en los resultados. No hay posibilidad tal en el método de ELISA directo.

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