Fuentes de error en los geles de electroforesis

Escrito por sarahc | Traducido por maría martha martorell
  • Comparte
  • Twittea
  • Comparte
  • Pin
  • E-mail
Fuentes de error en los geles de electroforesis
El gel de electroforesis es comunmente asociada con su aplicación para el ADN. (Ryan McVay/Photodisc/Getty Images)

La electroforesis en gel se utiliza en laboratorios para clasificar y medir las proteínas o ácidos nucleicos. Después de una cuidadosa preparación, las muestras se cargan en un extremo del gel, una corriente eléctrica es aplicada, y las muestras corren hacia el extremo positivo de la bandeja. Como con cualquier procedimiento científico, la posibilidad de error humano y de otras fuentes de error existe y debe ser tomado en consideración al interpretar los resultados.

Otras personas están leyendo

Contaminación de la muestra

Sea lo que sea que estés midiendo, el primer paso para obtener resultados precisos es una muestra no contaminada. Toma medidas para evitar la contaminación durante la preparación con el uso de guantes, utilizando sólo envases estériles, y cambiando la punta de la pipeta después de cada uso. También ten cuidado de no contaminar tu pipeta por tomar la muestra y hacer que suba hasta la pipeta.

Fuentes de error en los geles de electroforesis
Los guantes te protegeran a ti y a tus muestras. (latex gloves image by Wendy Lea Morgan from Fotolia.com)

Problemas en el gel

Muchos errores se deben a problemas con el gel. En primer lugar, una concentración de gel incorrecta puede hacer que el gel corra demasiado rápido o no corra en absoluto. Asegúrate de que estás utilizando una concentración que está bien medida y orientada hacia los tamaños generales de la muestra que se está tratando de medir. Por ejemplo, cuando trabajamos con una muestra de ADN, un gel de 0,7 por ciento le permitirá ordenar eficazmente los fragmentos que se ubican entre 800 y 10.000 pares de bases de longitud, mientras que los fragmentos más pequeños necesitarían un gel de porcentaje más alto.

El gel puede verse comprometido de otras maneras. Antes de cargar las muestras, asegúrate de que el gel no tiene cortes o burbujas. Incluso una pequeña imperfección puede afectar tus resultados. La preparación adecuada del gel es la clave. Sigue todas las instrucciones, vierte lentamente para evitar la formación de burbujas, y deja que el gel se enfríe completamente antes de cargar las muestras. La matriz molecular del propio gel y la capacidad de la muestra para correr a través de esta matriz al extremo cargado positivamente, son los que demostrarán el tamaño de la muestra. Un trastorno físico o incluso una temperatura demasiado extrema afectarán esta matriz molecular y pondrán en peligro la validez de los datos.

Por último, cuando se establece un gel se coloca un peine para crear los pozos donde se cargan las muestras. Ten cuidado de que este peine se coloque correctamente en los recuadros de la bandeja, ya que un peine que cree pozos demasiado profundos o superficiales puede conducir a errores. El peine no debe llegar completamente a través del gel a la parte inferior de la bandeja, pero debe crear pozos lo suficientemente profundos para cargar sus muestras sin desbordamientos.

Fuentes de error en los geles de electroforesis
Las claves son tomar medidas correctas y tener la concentración apropiada en el gel. (cylinder image by Hubert from Fotolia.com)

Carga de muestras incorrectas

Aunque parece bastante simple, cargar tus muestras en los pocillos pequeños en el gel puede resultar difícil. Lo más importante es asegurarte de que sabes cuánto vas a poner en cada pocillo. El exceso de la muestra podría causar que sean manchas grandes o que aparezcan más pequeñas de lo que realmente son; a su vez, muy poco de la muestra puede ser imposible de ver. Además, no perfores el gel al cargar las muestras, ya que esto puede causar problemas, al igual que las otras imperfecciones de gel.

Problemas en la corriente eléctrica

Un error común para los nuevos estudiantes de la técnica de electroforesis en gel es correr el gel hacia atrás. Esto sucede cuando las conexiones positivas y negativas se unen a los extremos incorrectos de la bandeja. Se puede evitar este error recordando que la muestra se correrá siempre al rojo, por lo que asegúrate de que el extremo positivo esté unido en el lado opuesto de la bandeja de los pocillos de la muestra.

También existen problemas con el uso de un voltaje incorrecto. Una tensión demasiado alta puede causar que la muestra corra al otro extremo del gel tan rápido que se caiga del mismo, mientras que una demasiado baja puede significar que la muestra se tome demasiado tiempo para correr o no corra lo suficientemente lejos para ser cuantificada al final. La colocación incorrecta de la bandeja con la corriente o interrupciones en la última pueden causar que la muestra para corra en diagonal o inconsistentemente, lo que puede hacer difícil una medición precisa.

Fuentes de error en los geles de electroforesis
Trabajar con la corriente adecuada es clave. (high voltage image by Soja Andrzej from Fotolia.com)

Problemas en la visualización

Si no puedes ver los resultados, es obvio que tendrás problemas para interpretarlos. Una muestra demasiado pequeña puede ser difícil de visualizar. Los problemas con los métodos de visualización también pueden comprometer los resultados. Los métodos más comunes usan tintes visibles o bromuro de etidio (para la visualización bajo luz ultravioleta). Estos deben añadirse al gel en las concentraciones correctas, o la visualización puede ser obstaculizada.

Mediciones variables

La medición variable es una fuente ampliamente aceptada de error en electroforesis en gel que los estudiantes suelen pasar por alto. Cuando se mide la longitud del gel que la muestra recorrió, la regla será limitada en precisión, probablemente un milímetro. Cuando la medida parece situarse entre milímetros, no serás capaz de especificar la medida exacta. Además, las bandas formadas por electroforesis pueden variar en grosor. ¿Mediste la parte superior o inferior de la banda en cada columna? La consistencia es importante, pero medir hasta el borde de la banda más alejada del pozo es lo más común. Ten en cuenta que esta fuente de error probablemente también afectó el monto de la muestra y las concentraciones de otros componentes en tu experimento.

Fuentes de error en los geles de electroforesis
La precisión de las mediciones se verá afectada por tus instrumentos. (steel ruler image by dwags from Fotolia.com)

No dejes de ver

Filtrar por:
  • Mostrar todos
  • Artículos
  • Galerías de fotos
  • Videos
Ordenar:
  • Más relevante
  • Más popular
  • Más reciente

No se encuentran artículos disponibles

No se encuentran slideshows disponibles

No se encuentran videos disponibles