¿Cuál es la función del tinte de rastreo en la electroforesis en gel?

Escrito por susan t. mcclure | Traducido por martín giovana
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¿Cuál es la función del tinte de rastreo en la electroforesis en gel?
La electroforesis en gel separa los fragmentos de ADN por tamaño. (DNA image by Allyson Ricketts from Fotolia.com)

La electroforesis en gel es una forma de separar fragmentos de ADN según su tamaño. Agrega tinta de seguimiento a cada muestra de ADN para ayudarte a ver la muestra y realizar el seguimiento del progreso de los fragmentos de ADN a través del gel.

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Significado

Para separar los fragmentos de ADN, con el fin de medir su tamaño o para aislar un fragmento en particular, los científicos ponen ADN dentro de un gel de agarosa sumergido en una solución cargada con una corriente eléctrica. La corriente empuja los fragmentos de ADN a través del gel, y debido a que éste es poroso, los pequeños fragmentos de ADN se arrastran a través su camino más rápidamente. Estos viajan más lejos que los fragmentos más grandes en la misma cantidad de tiempo.

Propósito

El ADN es incoloro cuando está en una solución en un tubo de ensayo. Para hacer que la muestra sea más fácil de ver, tanto en el tubo de ensayo como en el gel, se añade un tinte de color para el seguimiento de la muestra. El tinte no afecta al ADN en absoluto.

Seguimiento

El colorante de seguimiento habitual es el azul de bromofenol en una solución de glicerol al 50 por ciento. Éste tiñe a la muestra de un color azul brillante de modo que sea fácil de seguir su progreso a través del gel. Cuando el colorante de rastreo ha viajado alrededor de 3/4 de la longitud del gel, es momento de apagar la corriente eléctrica.

Densidad

El tinte de seguimiento es denso debido a su alta concentración de glicerol. Eso hace que las muestras de ADN se hundan en las ranuras de carga del gel, en lugar de flotar lejos en la solución por encima del gel que lleva la corriente eléctrica.

Migración del tinte

El azul de bromofenol migra a través de una solución de agarosa al menos aproximadamente la misma velocidad que una cadena de ADN que contiene 300 pares de bases. Si deseas seguir el progreso de las hebras de ADN más grandes, puedes utilizar un colorante de seguimiento con xileno cianol, que migra a aproximadamente la misma velocidad que una cadena de ADN con 4.000 pares de bases.

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