Cómo identificar una bacteria desconocida en microbiología

Escrito por amanda williams | Traducido por enrique pereira vivas
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Cómo identificar una bacteria desconocida en microbiología
Las placas de frotis te permiten aislar las bacterias para identificar fácilmente sus características. (Hemera Technologies/Photos.com/Getty Images)

Al momento que tomas un curso de nivel universitario de microbiología, el profesor puede requerirte que completes un proyecto donde se te da una bacteria desconocida, y, mediante la ejecución de una serie de pruebas, debes identificar cuál es esa bacteria. Con el fin de identificar correctamente las bacterias desconocidas, es necesario contar con todo el equipo de laboratorio adecuado y el conocimiento de diversos procedimientos de laboratorio. También es beneficioso tener un diagrama de flujo de las bacterias y los resultados de las pruebas de laboratorio para que puedas identificar de qué bacteria se trata.

Nivel de dificultad:
Moderadamente fácil

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Instrucciones

  1. 1

    Configura todas las pruebas antes de comenzar el experimento. Esto incluye la preparación de las placas de agar y tubos, así como el establecimiento de los indicadores necesarios, tales como el reactivo de Kovac. Marca todos los tubos y las placas apropiadamente de modo que éstos no se mezclen y llegues a resultados imprecisos.

  2. 2

    Realiza una tinción de Gram en tus bacterias. Esto determinará la forma y el color de éstas, tales como Gram positiva (color lila), Gram negativa (rojo o rosa en color) y cocos (circular), espiroqueta (en forma de espiral) o en forma de varilla. Para la tinción de Gram de tus bacterias, necesitarás un portaobjetos limpio, agua, cristal violeta, yodo, decolorante, safranina, papel secante, un microscopio compuesto de luz y algunas toallas de papel. Después de flamear tu bucle; utilízalo para colocar una gota de agua en un portaobjetos. Flamea el bucle de nuevo, a continuación, coloca una pequeña cantidad de tus bacterias desconocidas en la gota de agua. Pasa la corredera a través de una llama algunas veces para secar completamente las bacterias a la diapositiva. Cubre el portaobjetos con el cristal violeta, déjalo reposar durante un minuto y luego enjuágalo suavemente. A continuación, cubre la diapositiva en yodo. Deja que esto se asiente durante 30 segundos, luego enjuaga. Seca el portaobjetos con papel absorbente para eliminar el exceso de tinte. A continuación, vierte el decolorante en la diapositiva. Después de cinco segundos, enjuaga el decolorante apagado. Por último, cubre la diapositiva con safranina. Después de 40 segundos, enjuaga el portaobjetos y sécalo con una toalla de papel. Coloca una gota de aceite en la diapositiva donde está la bacteria y obsérvala bajo el microscopio. Toma nota de las formas y colores de las bacterias visibles.

  3. 3

    Lleva a cabo una prueba de oxidasa en tus bacterias. Para esta prueba, necesitas un papel de filtro, el reactivo de oxidasa, E. coli, Pseudomonas y tus bacterias desconocidas. En esta prueba, la E. coli y la Pseudomonas son tus controles. Tus bacterias deben tener menos de 24 horas de edad para esta prueba. Flamea tu bucle y coloca una pequeña cantidad de cada bacteria en un trozo de papel de filtro. Usa un gotero para colocar una gota de reactivo de oxidasa en cada bacteria. Después de diez segundos, toma nota del color de cada bacteria. E. coli que te dará un resultado negativo, mientras que las Pseudomonas te darán un resultado positivo. Las bacterias positivas para el uso de la enzima citocromo oxidasa se ​​vuelven de color púrpura. Las bacterias negativas no cambiarán de color.

  4. 4

    Realiza una prueba de Sulfuro Indol Motilidad (SIM, por sus siglas en inglés). Flamea tu bucle y utilízalo para recoger algunas bacterias de tu placa. Inocula el tubo SIM con tus bacterias y coloca la tapa en el tubo. Deja que este tubo se asiente durante 18 a 24 horas a 37 grados Celsius. Identifica si tus bacterias son móviles, lo que significa que tienen flagelos. Si parece que hay nubosidad y un crecimiento donde inoculaste las bacterias, tus bacterias son móviles. A continuación, coloca dos gotas de reactivo de Kovac en el tubo. Si el tubo tiene cualquier cambio de color rojo o rosado, tu bacteria es positiva para esta prueba y contiene triptófano, lo que significa que es un productor de indol. Si el tubo se vuelve negro, tu bacteria es un productor de sulfuro de hidrógeno.

  5. 5

    Realiza una prueba de citrato de Simmons. Con dos tubos de ensayo de agar de Simmon, inocúlalos con tus bacteria. Deja que reposen durante 18 a 24 horas a 37 grados Celsius. El agar es inicialmente verde, pero si tu bacteria utiliza citrato como única fuente de carbono, el color cambiará de verde a azul. El azul es el resultado positivo de la prueba. Si el tubo se mantiene verde, tu bacteria es negativa para el uso de citrato como única fuente de carbono.

  6. 6

    Realiza una prueba rojo de metilo Voges-Proskauer (MRVP, por sus siglas en inglés). Para esta prueba, necesitarás dos tubos de ensayo llenos de caldo de peptona que contengan peptona, tampones y dextrosa (o glucosa). Inocula cada tubo con tu bacteria desconocida y deja que ésta se asiente en una habitación a 37 grados durante 18 a 24 horas. Cuando esté listo, añade tres gotas de rojo de metilo a un tubo. Éste será tu tubo MR. Si el tubo cambia de amarillo a rojo, tu bacteria es positiva y utiliza una ruta del ácido mixto durante la fermentación (ácido láctico, acético y fórmico son producidos). En tu segundo tubo, añade tres gotas de reactivo VP. Si el tubo se pone rojo, es positivo para la creación de diacetilo, un producto de fermentación. Si el tubo es de color marrón, tu bacteria es negativa.

  7. 7

    Elimina la bacteria de tu diagrama de flujo a medida que lees cada prueba y determina si tu bacteria es negativa o positiva para la prueba.

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