Pasos en la electroforesis en gel

Escrito por liz tomas | Traducido por valeria garcia
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Pasos en la electroforesis en gel
La electroforesis en gel mide el tamaño de los genes y los filamentos de ADN. (Chad Baker/Ryan McVay/Digital Vision/Getty Images)

La electroforesis en gel es un proceso que se utiliza para medir el número o tamaño de ADN, ARN, genes y proteínas. El gel es la matriz a través de la cual viajan las muestras, y serán separadas según su tamaño. Los tamaños pequeños viajarán más mientras que las moléculas más grandes y más densas viajarán sólo una corta distancia. Esta técnica se utiliza con frecuencia como un primer paso en muchos experimentos genéticos para asegurar que el producto deseado esté presente.

Nivel de dificultad:
Moderadamente difícil

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Necesitarás

  • Agar
  • Agua destilada
  • Cloruro de sodio
  • Peine, molde y cámara de electroforesis de gel
  • Muestra
  • Tinte (normalmente bromuro de etidio)
  • Superficie oscura
  • Pipetas y puntas de pipeta
  • Guantes
  • Fuente de alimentación
  • Transiluminador
  • Cámara digital

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Instrucciones

  1. 1

    Crea el gel con el agar. Mezcla el agar junto con el agua y disuélvelo calentando. La cantidad de agar y el agua que necesitas variará, así que asegúrate de seguir lo que se recomienda en el frasco de agar. Inserta el peine de electroforesis en el molde del gel. El peine crea los pozos donde se coloca la muestra. Vierte el agar caliente en el molde y déjalo enfriar. Se solidificará cuando esté frío. Retira el peine de gel del molde.

  2. 2

    Dibuja un pequeño diagrama del gel y etiqueta que muestra entrará en cada pozo. Esto es muy importante ya que los geles pueden contener muchos pozos y no recordarás qué muestra fue cargada en cada pocillo. Debes mantener un registro.

  3. 3

    Coloca el gel frío sobre una superficie oscura, ya que esto hace que sea más simple para cargar las muestras en todos los pozos. Se recomienda que solo cargues muestras en un pozo de por medio, ya que esto evita cualquier sobreposición o sangrado en el gel. Usando una pipeta, mezcla cada muestra con una pequeña cantidad de tinte. La mayoría de las veces este tinte contendrá bromuro de etidio, una sustancia tóxica. Utiliza guantes cuando mezcles las muestras. Ten cuidado al cargar las muestras en los pocillos. Si presionas demasiado lejos la punta de la pipeta, se irá en el gel, lo cual lo arruinará. Necesitarás hacer un nuevo gel si esto ocurre.

  4. 4

    Coloca el gel con las muestras cargadas en la cámara de electroforesis. El lado con las muestras debe orientarse para que estén más cercanos al negro, o la terminal negativa.

  5. 5

    Mezcla una solución de sal con cloruro de sodio y agua destilada. Vierte esta solución salina en cada lado de la cámara hasta que el nivel del agua sólo cubra la parte superior del gel. Es mejor verter la sal primero en los pozos en los dos lados que contienen el gel. Luego, vierte la solución en el lado opuesto de la muestra para cubrir el gel. Esto reduce la difusión de cualquier posible muestra durante el llenado.

  6. 6

    Coloca la tapa de la electroforesis en la cámara y conecta el cable rojo al borne positivo de la cámara y el cable negro al borne negativo. Enciende la fuente de poder, asegurando que la tensión sea de entre 50 y 100 voltios. Deja el gel durante unos 10 minutos. Verás cómo las muestras se separan a medida que corren por el gel.

  7. 7

    Prende la fuente de energía y retira la tapa de electroforesis. Retira el gel y colócalo en un transiluminador. El transiluminador es una caja de luz ultravioleta. Toma una foto del gel. El bromuro de etidio se volverá fluorescente y puedes ver las distintas bandas de ADN. Imprime una foto de tu gel si puedes.

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