Cómo hacer una prueba ELISA

Escrito por allan robinson | Traducido por eduardo moguel

Un Ensayo por Inmunoabsorción Ligado a Enzimas (ELISA, por su siglas en inglés) es una técnica para detectar anticuerpos en una muestra. La prueba ELISA tiene aplicaciones en la inmunología, donde se usa como herramienta de diagnóstico médico, y también se utiliza como control de calidad en otras industrias. La ELISA requiere al menos un anticuerpo que sea específico al antígeno que está siendo probado y algún medio para hacer detectable el antígeno.

Nivel de dificultad:
Moderado

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Instrucciones

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    Prepara la muestra. El procedimiento varía de acuerdo al examen ELISA específico. Por ejemplo, en una ELISA para VIH, el suero sanguíneo se diluye 400 veces antes de aplicarlo a la placa que contiene los antígenos del VIH.

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    Lava la placa para remover los demás componentes del suero sanguíneo. Aplica un anticuerpo secundario que adhiera los anticuerpos VIH a la placa y lava de nuevo la placa. Estos anticuerpos secundarios están químicamente vinculados a la enzima que la placa contiene en proporción con la cantidad de anticuerpos secundario.

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    Aplica un sustrato para hacer detectable la enzima. Esto suele provocar que la enzima cambie de color o se torne iridiscente. El resultado de una ELISA debe reportarse como un número para que el cambio de color pueda cuantificarse de alguna forma.

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    Establece el límite para un resultado positivo. Ésta es la parte más difícil de la prueba, pues el resultado puede cubrir un rango amplio. Por lo tanto, se debe seleccionar un valor mínimo para identificar un resultado positivo.

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    Realiza una ELISA en una muestra de control que tenga una concentración conocida del analito y establece la señal que la muestra produce como estándar. Cualquier resultado que produzca una señal más potente que la muestra de control, será un resultado positivo.

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