Cómo reiniciar una columna C18

Escrito por sean lancaster | Traducido por enrique pereira vivas
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Cómo reiniciar una columna C18
Regenera tu columna C18 de fase inversa de HPLC. (Jupiterimages/Comstock/Getty Images)

La cromatografía líquida de alta presión (HPLC, por sus siglas en inglés) es una herramienta para la separación de productos químicos de una mezcla. La separación e identificación de productos químicos en particular dentro de una mezcla se producen principalmente en la columna de HPLC en el sistema. Muchos tipos de columnas están disponibles para los sistemas de HPLC y cada tipo está destinado a un tipo específico de análisis. La columna C18 es la columna más fuerte no polar que generalmente se utiliza. Después de un uso continuo durante un periodo de tiempo prolongado, la velocidad de flujo de disolvente a través de la columna disminuye y aumenta el tiempo analítico para un análisis. Otra causa de la ralentización de un análisis es tener muestras que dejan pequeñas cantidades de productos químicos en el material de la columna y la reducción de la capacidad de la columna para separar los productos químicos. La regeneración de la superficie de la columna se lleva a cabo por tratamiento del material de embalaje a una serie específica de disolventes para limpiar las muestras sobrantes en la columna y revitalizar el material de soporte.

Nivel de dificultad:
Difícil

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Necesitarás

  • Agua de calidad HPLC
  • Metanol de calidad HPLC
  • Isopropanol de calidad HPLC
  • Hexano de calidad HPLC
  • Diclorometano de calidad HPLC
  • Fase estándar invertida

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Instrucciones

  1. 1

    Desconecta la columna C18 de la corriente de flujo y reemplaza la columna en la dirección inversa. La ejecución de la parte posterior de disolvente a través de la columna en la dirección opuesta aflojará el efecto de embalaje que se produce con el tiempo. Se debe tener cuidado de no perder una gran cantidad de material de embalaje del final de la columna. Algunos fabricantes utilizan una malla más grande en el extremo aguas arriba de la columna, de modo que cuando la dirección del flujo se invierta la malla más grande esté en la posición de aguas abajo. Este método de regeneración se denomina lavado a contracorriente. Para protegerse contra el material de embalaje que fluye hacia el detector del sistema y de causar posiblemente un tapón, permite que el sistema funcione sin el detector conectado y dirija el flujo de salida de la columna a los residuos.

  2. 2

    Coloca el tubo de entrada de disolvente en una serie de disolventes para provocar la elución de los compuestos retenidos con la columna en la dirección inversa. La serie de disolventes usados ​​varían en sus características hidrófilas. Mediante la variación de los disolventes eluirás compuestos de naturaleza hidrófila igualmente variada. Utiliza 50 ml de cada uno de los siguientes disolventes sucesivamente: agua (si estás utilizando un tampón en tu disolvente), metanol, isopropanol, diclorometano, hexano, diclorometano e isopropanol.

  3. 3

    Vuelve a conectar la columna en la orientación correcta y ejecuta el disolvente a través del sistema. Usa por lo menos 75 ml de disolvente para lavar la columna antes de proceder. Ejecuta una prueba de inyección de un estándar que ejecutaste cuando la columna era nueva y comprueba los resultados. Presta especial atención a las horas de máxima retención, colas de picos y el tiempo total de análisis. El grado en que estos atributos coincidan con la ejecución inicial de la columna cuando era nueva indicará el grado en que ha sido regenerada la columna. Si los resultados no son satisfactorios, reemplaza la columna con una nueva y tira la columna vieja en la basura.

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