Cómo solucionar problemas de los dímeros de cebadores de PCR

Escrito por shana antonucci | Traducido por karolynne gardim
  • Comparte
  • Twittea
  • Comparte
  • Pin
  • E-mail
Cómo solucionar problemas de los dímeros de cebadores de PCR
La solución de problemas para los dímeros de cebadores es fácil con unos sencillos pasos. (laboratory equipment image by Canakris from Fotolia.com)

Los dímeros de cebadores son un obstáculo frustrante para encontrar mientras se ejecutan reacciones en cadena de polimerasa o PCR. Se producen cuando los extremos de los cebadores son complementarios, lo cual induce a la vinculación. Los cebadores enlazados se muestran como bandas cortas en su longitud ​​utilizados en una gel de agarosa. Hay unos cuantos métodos simples que puedes utilizar para deshacerte en tu experiencia de dímeros de cebadores antes de recurrir a un rediseño completo de ellos.

Nivel de dificultad:
Moderado

Otras personas están leyendo

Necesitarás

  • Sulfóxido de dimetilo (DMSO)
  • Un kit de inicio caliente de PCR (opcional)
  • Reactivos de PCR y suministros solicitados en tu protocolo

Lista completaMinimizar

Instrucciones

    Solución de problemas de tu protocolo

  1. 1

    Utiliza una baja concentración de cebador. Prueba con una dilución de 1:10 de lo que se solicita para tu procedimiento.

    Cómo solucionar problemas de los dímeros de cebadores de PCR
    Utiliza una baja concentración de cebador. (Hemera Technologies/AbleStock.com/Getty Images)
  2. 2

    Aumenta la temperatura de recocido para tu procedimiento. Mueve la temperatura hasta 5 grados celsius (41 ºF) por debajo de la temperatura de fusión del cebador más pequeño.

    Cómo solucionar problemas de los dímeros de cebadores de PCR
    Aumenta la temperatura de recocido para tu procedimiento. (Hemera Technologies/AbleStock.com/Getty Images)
  3. 3

    Añade sulfóxido de dimetilo (DMSO) hasta 5 por ciento del volumen de reacción. Esto mejorará la especificidad de la plantilla de ADN para los cebadores, lo que ayuda a disminuir la aparición de dímeros.

    Cómo solucionar problemas de los dímeros de cebadores de PCR
    Plantilla de ADN para los cebadores. (Thomas Northcut/Lifesize/Getty Images)
  4. 4

    Utiliza un kit de PCR de inicio caliente para maximizar la especificidad, si los pasos sencillos anteriormente indicados no son eficaces. Sigue cuidadosamente las instrucciones que se incluyen con tu kit.

    Cómo solucionar problemas de los dímeros de cebadores de PCR
    Sigue las instrucciones del kit de PCR. (Comstock/Comstock/Getty Images)
  5. 5

    Ve a la última instancia. Rediseña tus cebadores para asegurar que los extremos no son complementarios.

    Cómo solucionar problemas de los dímeros de cebadores de PCR
    Rediseña tus cebadores. (Hemera Technologies/AbleStock.com/Getty Images)

No dejes de ver

Filtrar por:
  • Mostrar todos
  • Artículos
  • Galerías de fotos
  • Videos
Ordenar:
  • Más relevante
  • Más popular
  • Más reciente

No se encuentran artículos disponibles

No se encuentran slideshows disponibles

No se encuentran videos disponibles