Cómo interpretar el gel de agarosa

Escrito por john brennan | Traducido por laura gonzalez
  • Comparte
  • Twittea
  • Comparte
  • Pin
  • E-mail
Cómo interpretar el gel de agarosa
Cómo analizas los resultados del gel dependerá en parte de lo que estás buscando (Jason Reed/Digital Vision/Getty Images)

Una vez que efectuas muestras de ADN en un gel de agarosa y le has sacado una foto, puedes guardarla para luego analizar los resultados e interpretarlos. Los tipos de cosas que estás buscando dependerán de la naturaleza del experimento. Si estás haciendo huellas digitales de ADN, por ejemplo, querrás comparar el tamaño de las piezas de ADN de dos muestras, del sospechoso y la muestra obtenida en la escena del crimen, quizás. Si estás trabajando con plásmidos de bacterias, por contraste, podrías tener que asegurarte de que el plásmidos contiene el inserto. Consecuentemente, cómo interpretas el gel dependerá en parte del experimento que hiciste. No obstante, existen algunas reglas generales que puedes aplicar.

Nivel de dificultad:
Moderado

Otras personas están leyendo

Necesitarás

  • Un lápiz
  • Papel
  • Programa de hoja de cálculo
  • Foto del gel
  • Una regla

Lista completaMinimizar

Instrucciones

  1. 1

    Comenzando desde la parte superior de la imagen, mide la distancia hasta cada banda de la sección "estándar" de tu gel (alias la escalera). El carril estándar contiene piezas de ADN cuyo tamaño es ya conocido, para que puedas ya conocer el tamaño de cada uno antes de comenzar el experimento. También mide la distancia recorrida por las bandas en cada una de las muestras.

  2. 2

    Divide la distancia entre cada estándar y cada banda de las muestras que recorre la distancia hacia la parte inferior del gel. El resultado es denominado movilidad relativa. Puedes usar el programa de hoja de cálculo para hacer los cálculos si esto te resulta más rápido.

  3. 3

    Ingresa la movilidad relativa y el tamaño de cada estándar en tu programa de hoja de cálculo, luego usa la herramienta gráfica para crear un gráfico de esta información con la movilidad en el eje X y el tamaño en el eje Y.

  4. 4

    Inserta una línea en el gráfico usando una regresión no linear. Consulta la sección de ayuda del programa de cálculo si precisas aprender a hacerlo. Deberías terminar con una ecuación, quizás una similar a la siguiente:

    y = (0,3) x^-2,5

    Nota que la x será la movilidad relativa, mientras que y será el tamaño. También observa que tu ecuación podría tener números completamente diferentes para el exponente y el coeficiente; esta ecuación sólo se provee como ejemplo hipotético.

  5. 5

    Toma la movilidad relativa para las bandas para tu muestra y colócala como una x para calcular el tamaño de las piezas de ADN en la muestra.

    Supón que la ecuación derivada de tu programa de cálculo es y = (0.3) x^-2,5, y la movilidad relativa de una muestras particular era 0,68. Substituye 0,68 en tu ecuación, encontrando lo siguiente:

    y = (0,3) (0,68)^-2,5

    Usando tu calculadora, eleva el 0,68 al -2,5 y obtén lo siguiente:

    y = (0,3) (2,62)

    y = 0,786

    que luego deberá ser el tamaño estimado en kilobases del ADN en una de las bandas de tu prueba.

    Plásmidos

  1. 1

    Observa que podrías o no necesitar utilizar las instrucciones en esta sección. Electroforesis en gel de agarosa se usa a menudo para confirmar que un plásmido contiene un inserto determinado. Si no estás trabajando con plásmidos, puedes evitar esta sección. Si lo estás haciendo, sin embargo, puedes seguir estas instrucciones.

  2. 2

    Observa que si estás trabajando con un plásmido cortado o mellado, no podrás estimar el tamaño usando el procedimiento de las sección 1. Esto se debe a que éstos migran en diferentes índices desde el ADN lineal.

  3. 3

    Compara el número de bandas en cada sección. Recuerda que una enzima de restricción corta el ADN en sitios en donde la secuencia llamada sitio restricción ocurre. Si una muestra fue tratada con DOS enzimas de restricción, debería presentarse una banda para el inserto y otra para el remanente del plásmido. Esto se debe a que el inserto será flanqueado por dos sitios de restricción, cada uno para una enzima diferente, entonces los cortes en ambos sitios liberarán el inserto desde el plásmido. Un corte en un solo sitio, en contraste, convertirá al plásmido en un ADN linear. Un corte de muestra sin restricción de enzima o una restricción de enzima, entonces, debería mostrar una banda simple, mientras que un corte de muestra con dos enzimas de restricción debería tener dos bandas.

  4. 4

    Busca bandas creadas por ADN mellados. Un plásmido mellado tiene un corte en una sola rama, entonces migra más lentamente que el corte de un plásmido. Los plásmidos cortados migran más lentamente que un ADN sin cortar.

  5. 5

    Estima el tamaño del inserto usando el procedimiento descrito en la Sección 1 y determina si se ajusta a tus expectativas (que variarán dependiendo del experimento).

No dejes de ver

Filtrar por:
  • Mostrar todos
  • Artículos
  • Galerías de fotos
  • Videos
Ordenar:
  • Más relevante
  • Más popular
  • Más reciente

No se encuentran artículos disponibles

No se encuentran slideshows disponibles

No se encuentran videos disponibles