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Protocolo para preparar geles de poliacrilamida para electroforesis

Escrito por narkisspressburger | Traducido por mayra cabrera
Protocolo para preparar geles de poliacrilamida para electroforesis

La electroforesis fragmenta a las proteínas de acuerdo a su peso molecular.

David Silverman/Getty Images News/Getty Images

La electroforesis en gel se utiliza en el laboratorio con el fin de separar las proteínas o ácidos nucleicos a partir de uno al otro. La electroforesis utiliza con frecuencia poliacrilamida en lugar de agarosa para proteínas para determinar las masas moleculares de los polipéptidos de la proteína.

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Preparación del gel de agarosa

Un gel de poliacrilamida se prepara con ranuras en éste. El gel se forma al vertir una solución líquida caliente de poliacrilamida en un contenedor poco profundo. El contenedor debe contener una estructura con forma de peine con dientes que estén orientados hacia abajo en la solución. La poliacrilamida se convierte en un gel poco después de que se ha vertido y se retira el peine para revelar los agujeros rectangulares formados.

Dodecil sulfato de sodio (SDS)

La proteína es tratada con dodecil sulfato de sodio (SDS, por sus siglas en inglés) con el fin de desnaturalizar las subunidades de una proteína grande de modo que cada una se pueda medir por separado. Las ventajas de esto son que el SDS da a los polipéptidos una carga negativa, por lo que migrarán al extremo negativo o ánodo, del gel. En segundo lugar, el SDS asegura que todas las subunidades tengan la misma carga, por lo que todas van a migrar en el gel de acuerdo con sus masas moleculares en lugar de sus cargas.

Adición de proteínas

Una pequeña cantidad de ADN o proteína se coloca en una de las ranuras rectangulares en un extremo del gel. Una corriente eléctrica pasa a través del gel a un pH neutro. Cerca de unos 10 microlitros de una escalera de ADN, así como dos controles, también se cargan en el gel. La escalera de ADN se utiliza para permitir la medición de qué tan lejos se movió la muestra en el proceso de electroforesis.

Electroforesis

La máquina se enciende a 100 voltios y se deja que funcione durante 30 minutos. Después de que las muestras han pasado por electroforesis durante 30 minutos, el gel junto con una bandeja se retira y se coloca en una bandeja de tinción durante unos tres minutos. Esto es seguido por la colocación del gel en agua tibia durante cinco minutos. El gel está listo para ser colocado en la caja de luz con el fin de observar el movimiento de los fragmentos de ADN.

Otras consideraciones

Al visualizar el gel bajo la luz, algunas cosas importantes deben ser tomadas en consideración. Una célula puede ser homocigoto o heterocigoto para el gen dependiendo de si la copia está presente o no presente en ambas copias o en una solo. El resultado heterocigoto puede aparecer como una única banda debido a que los segmentos de ADN que se amplifican de manera más eficiente aparecen más oscuros en el gel. También se añade un medio de contraste de forma que cada polipéptido se pueda ver, tanto durante como después de la electroforesis.

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